quand on n'a pas de tête...

...on a des mains !

Surtout quand on doit recommencer 36.000 fois les solutions tampons et dilutions diverses ! Ou que l'on n'est pas fichue de faire un dosage de Bradford ! Illustration :

Gamme étalon avec la BSA (serum albumine bovine) foirée ! Dès la 3ème dilution on sature !

15 minutes plus tard... On lance les 20 minutes d'incubation de la "bonne" gamme de dilution (facteur 10 par rapport à la précédente) !

Donc voilà des tests d'activité qui commencent bien ! :s Mais ce n'est que le début ! Dans la même série : dilution de H2O2 de 1M à 15mM dans du tampon phosphate 1M au lieu de 50mM... Y a juste un petit problème de dilution... il manque juste un petit facteur de dilution de 20 ! :s

Mais tout va très très bien !

Et puis ces fichus tests d'activité où on galère pour comprendre comment fonctionne le programme "kinetics" ! Déjà le nom en lui même me fait froid dans le dos ! Brrr ! Et là, en très exactement quelques millièmes de seconde il faut mettre l'enzyme (ma très chère catalase purifiée à la sueur de nos fronts !) dans la cuve qui contient le fameux H2O2 15mM, mélanger, mettre dans le spectro et démarrer le programme ! Appelez-moi Wonder Woman ! Certains diront "Bah, c'est juste un coup de main à prendre !". Ben moi je peux vous dire qu'en plus du coup de main, il faut être ultra-concentré quite à mettre des boules quies et être plus rapide que l'éclair ! Mais bon, j'ai bien pris le "coup de main" je crois... ;)

Mais la bioch' ne s'arrête pas là ! Pour se mettre dans le bain, on a commencé par faire des gels de protéines. Facile ! Oui, quand les gels polymérisent. Quand ils ne polymérisent pas, c'est nettement plus galère !

Faire un gel ? Oh, il y en a pour même pas 2h entre le coulage du gel et le dépôt des échantillons. Il nous en a juste fallu le double ! Mais le résultat est là...

Bon, on a juste un peu pas compris pourquoi notre migration s'est arrêtée au milieu des gels et n'est pas allée jusqu'en bas alors qu'on a bien arrêtée l'électrophorèse quand le bleu de dépôt était en bas du gel ! Encore un des mystère de la science...

Seule satisfaction, notre enzyme est à peu près pure (dernière piste sur le gel du haut et pistes après le marqueur en très joli bleu ciel). La bande de plus haut poids moléculaire correspond effectivement à notre protéine (à un monomère plus exactement, puisque cette protéine est un homotétramère). La bande plus basse qui varie de la même manière doit être un produit de dégradation, mais cela doit bien mettre quelque chose en évidence sur la structure ? Question à creuser, donc...