deb... gros projet...

Le premier tutorat de DEB (projet labo) est passé, c'était mercredi, à 11h50 très exactement... Avec Morgane, nous avons exposé notre problématique et ce que l'on comptait faire, en gros, pour mener à bien ce projet réduit puisque les TP ne se déroulent que sur 3 semaines...

adaptation phénotypique des cellules eucaryotes face à un stress induisant la production de ros :

importance de la catalase

En fait, le stress dont on va traiter (tenter de traiter ?) est le heat shock (oups, je veux dire choc thermique :s), stress qui implique la catalase T. Je m'explique : il y a 2 catalase, une cytoplasmique, la catalase T, et la catalase peroxisomale, la catalase A. Cependant, ces catalases interviennent dans des conditions de stress oxydant différent.

Stress oxydant ? C'est un stress qui induit la production d'espèce réactives de l'oxygène (ROS). Ces ROS sont mauvais pour la cellule car ils peuvent entraîner de graves dommage au niveau de l'ADN par exemple... Bref...

Toujours est-il que pour notre projet, on a l'obligation de le traiter en 3 grandes parties, mais avec un lien entre elles...

• atelier biochimie : le but est de caractériser la catalase A purifiée plus en détail. Nous on va tenter de la soumettre à nos conditions de heat shock et de voir l'effet sur son activité. En parallèle, on va travailler avec un autre binôme qui vont sûrement faire du dichroïsme circulaire.
• atelier levure : en gros, on va étudier l'activité catalase chez 2 mutants (un simple et un double) + souche sauvage en leur induisant un choc thermique autour de 40°C pendant différent temps (cultures en phase exponentielle de croissance), et mesurer en parallèle leur survie. On va également tenter de mesurer l'activité d'une autre enzyme, la GPx qui pourrait peut être "prendre le dessus" en cas de défaillance de la catalase.
• atelier fibroblastes : le plus mieux bien ! ;) On veut faire de la cytométrie en flux sur nos cellules qui auront subit un stress dans les même conditions que pour les levures, cela afin de voir l'effet sur le cycle cellulaire. Faire également sur ces même cultures une détection des ROS par spectrofluorimétrie et extraction des protéines pour faire un western blot afin de foire la surexpression de la catalase. Cela afin de faire un lien entre l'induction du stress, ses effets au niveau de la cellule et comment ce défent-elle.

Ambitieux me direz-vous ? peut être. mais comme a dit un certain Einstein :

si une idée n'est par a priori absurde, elle est sans espoir

A méditer... ;)